腺相关病毒（AAV）包装

AAV是一种单链 DNA 病毒，因其非致病性、低免疫原性、不发生基因组整合、长期稳定表达等优势，是科研领域的重要体内基因递送工具，也是基因治疗中最常用的基因递送载体。同时，AAV丰富的血清型及其组织或细胞感染嗜性差异，为实现靶向性的基因递送提供了可能。 （1） 平台可包装AAV1、AAV2、AAV5、AAV7、AAV8、AAV9、AAV-rh10、AAV-retro、AAV2-PHP.B、AAV2-PHP.eB、AAV-PHP.S、AAV-B10、AAV-B22、AAV-ie、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV2.7m8等血清型病毒。如有其它血清型需求可与本平台沟通。 （2） 表达质粒（即表达目的基因并含有ITR序列的质粒，也称为穿梭质粒、transfer质粒、pAAV质粒、载体质粒等）需由申请人自行提供，或由平台代为构建。平台现有部分AAV表达质粒（见附表1），可共大家免费使用，或在其基础上构建自己的AAV表达质粒。 （3） AAV滴度为通过qPCR或ddPCR测得的病毒基因组拷贝数，一般为2x1012-5x1013 viral genome/mL （vg/mL）。实际滴度会受AAV血清型、基因组大小、基因序列等影响（某些情况下滴度可能小于1x1012 vg/ mL）。表达基因（含两个ITR及其中间的所有序列）大于4.8 kb时，将可能严重影响病毒产量和基因表达水平，请严格控制表达基因的序列长度。 （4） 纯化方式：平台提供氯仿抽提法和碘克沙醇超速离心法两种纯化方式可供选择。氯仿纯化法纯化效果较超离法略差，可满足大多数体内外实验需求，病毒产量较高，费用较低（详见参考文献）；碘克沙醇超速离心法能减少空衣壳数量（不含DNA的AAV颗粒），但滴度略低，费用较高，交付周期略长。参考文献：[1] Negrini M, et al. AAV Production Everywhere: A Simple, Fast, and Reliable Protocol for In-house AAV Vector Production Based on Chloroform Extraction. Curr Protoc Neurosci. 2020;93(1):e103. [2] Davidsson M, et al. A comparison of AAV-vector production methods for gene therapy and preclinical assessment. Sci Rep. 2020;10(1):21532.